Vaisiaus vandenų kamieninių ląstelių augimo, diferenciacijos ir senėjimo įvertinimas

Abstract

Žmogaus vaisiaus vandenys – naujas ir labai perspektyvus kamieninių ląstelių šaltinis. Šios ląstelės traktuojamos kaip įvairiagalės, tačiau turi ir daugiagališkumo žymenų: pasižymi embrioninėms kamieninėms ląstelėms būdingų transkripcijos veiksnių raiška bei gali diferencijuoti visomis trimis gemalinių lapelių kryptimis. Šioms ląstelėms gauti beveik nėra etinių apribojimų, kadangi mėginiai gali būti gaunami planinės amniocentezės metu. Reikia atlikti dar daug tyrimų norint šias ląsteles pritaikyti terapijoje. Būtina išaiškinti ląstelių augimo, diferenciacijos ir senėjimo molekulinių mechanizmų reguliaciją. Darbo metu vaisiaus vandenų kamieninės ląstelės charakterizuotos pagal kamieninėms ląstelėms būdingų paviršiaus žymenų ir anskripcijos veiksnių raišką, kokybiškai ir kiekybiškai įvertintas ląstelių diferenciacijos adipogenine, osteogenine, neurogenine ir miogenine kryptimis potencialas. Taip pat ištirti visuminio DNR metilinimo pokyčiai ląstelių diferenciacijos metu. Ištirta įvairių mikroRNR ir su ląstelės ciklo reguliavimu susijusių genų raiška normalaus ir sutrikusio vaisiaus vystymosi nėštumo mėginių ląstelėse auginant jas vienasluoksnėje kultūroje. Taip pat įvertintas ląstelių β-galaktozidazinis aktyvumas vėlyvoje augimo fazėje. Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, aparatūra, medžiagos, metodai, tyrimo rezultatai ir jų aptarimas, išvados ir literatūros sąrašas. Darbo apimtis 50 p. teksto be priedų, 23 paveikslai, 6 lentelės, 75 bibliografiniai šaltiniai.

Amniotic fluid is a novel and promising source of stem cells. These stem cells are considered to be multipotent but it is also shown to have some pluripotency markers like expression of embryonic transcription factors and ability to differentiate to cell lineages from all three germ layers. There are practically no ethical restrictions for isolation of these stem cells since they can be isolated from samples obtained during amniocentesis. A lot needs to be done before amniotic fluid stem cells could be used for therapeutic approach. First of all, the regulation of molecular mechanisms during cell growth, differentiation and senescence needs to be studied. In this work, amniotic fluid stem cells were characterized by the expression of stem cell specific surface markers and transcription factors, the cell potency to differentiate towards adipogenic, osteogenic, neurogenic and myogenic lineage was evaluated qualitatively and quantitatively. Also, global DNA methylation during cell differentiation was examined. The expression of different microRNAs and several genes associated with cell cycle regulation was established during amniotic fluid stem cell expansion in monolayer culture. Activity of β-galactosidase in late stage of cell culture was assessed as well. Structure: introduction, literature review, equipment, materials, methods, results and discussion, conclusions and references. Thesis consists of: 50 p. of text without appendixes, 23 figures, 6 tables, 75 bibliographic entries.