Monokloninių antikūnų prieš Hendra ir Nipah virusų nukleokapsidės baltymus gavimas ir charakterizavimas

Abstract

Šio darbo tikslas buvo gauti monokloninius antikūnus prieš Hendra ir Nipah virusų nukleokapsidės baltymus. Dėl didelės Henipavirus genties virusų nukleokapsidės baltym�� homologijos sunku gauti monokloninius antikūnus, specifiškus konkretaus viruso nukleokapsidės baltymui. Siekiant išspręsti šią problemą, buvo panaudoti chimeriniai rekombinantiniai baltymai, sukonstruoti pelės poliomos viruso pagrindinio kapsidės baltymo VP1 pagrindu, į kurį buvo įterptos nehomologiškos Nipah ir Hendra virusų nukleokapsidės baltymų sekos. Imunizacijoms panaudojus tokius chimerinius baltymus, buvo nustatyta, kad jie sukelia stiprų imuninį atsaką. Buvo sukurti nauji monokloniniai antikūnai, specifiški tik Nipah viruso nukleokapsidės baltymui ir nereaguojantys su Hendra viruso nukleokapsidės baltymu. Taip pat buvo sukurti monokloniniai antikūnai prieš baltymą-nešiklį – pelės poliomos viruso pagrindinį kapsidės baltymą VP1. Naujai sukurtų antikūnų specifiškumas buvo patvirtintas imunofermentinės analizės ir imunoblotingo metodais. Monokloninių antikūnų prieš Hendra viruso nukleokapsidės baltymą gauti nepavyko.

The aim of this study was to generate monoclonal antibodies against Hendra and Nipah virus nucleocapsid proteins. There is high homology between nucleocapsid proteins of Henipavirus genus members, therefore it is difficult to generate monoclonal antibodies that do not show any cross-reactivity with both antigens. This problem was solved by using recombinant chimeric proteins designed by insertion of non-homological segments of Hendra and Nipah virus nucleocapsid proteins into the mouse polyomavirus capsid protein VP1. Mice were immunized with these chimeric proteins and it was determined that they induce a strong immune response. Monoclonal antibodies against Nipah virus nucleocapsid protein as well as carrier protein – mouse polyomavirus capsid protein VP1 – were generated. The specificities of newly developed monoclonal antibodies were confirmed by ELISA and immunoblot. The generation of specific monoclonal antibodies against Hendra virus nucleocapsid protein failed.