PQQ priklausomos alkoholio dehidrogenazės katalizuojamų alkoholių virsmų, naudojant įvairius mediatorius, tyrimai

Abstract

Naudojant spektrofotometrinį metodą tirtas ADH IIG reaktingumas su skirtingais mediatoriais ir įvairiais alkoholiais. Nustatytos tariamųjų kinetinių parametrų KM ir Vmax reikšmės, bei paskaičiuotos katalitinės ir bimolekulinės alkoholių oksidacijos bei mediatorių redukcijos reaktingumo konstantos. Tirta FERO ir ABTS oksidacija katalizuojama L95 lakaze. Gautos pradinių reakcijos greičių priklausomybės nuo substratų koncentracijų. Rezultatų analizei pritaikius Michaelio-Menten lygtį, gautos tariamųjų KM ir Vmax reikšmės, iš kurių buvo paskaičiuotos katalitinės ir oksidacinės konstantos. Pamatuotos pradinio reakcijos greičio priklausomybės nuo buferinių tirpalų pH ir jų komponentų, bei nustatytos optimalios substratų oksidacijos reakcijos pH reikšmės. Naudojant deguoninį elektrodą buvo registruotas deguonies sunaudojimas vykstant L95 lakazės katalizuojamai FERO ir ABTS oksidacijai ir paskaičiuotas pradinis reakcijos greitis bei sunaudoto deguonies priklausomybės nuo substratų koncentracijų. Registruotas ir deguonies sunaudojimas vykstant ADH IIG katalizuojamai alkoholio oksidacijai ir lakazes katalizuojamai mediatoriaus (antrojo qADH substrato) regeneracijai. Darbą sudaro 6 dalys: įvadas, literatūros apžvalga, eksperimentinė dalis, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis – 85 p. teksto, 50 paveikslų, 8 lentelės, 109 bibliografiniai šaltiniai.

Reactivity of ADH IIG with different mediators and various alcohols were investigated by spectrophotometric method. Values of apparent kinetic parameters KM and Vmax were determined, catalytic and bimolecular alcohols oxidation and mediators reduction reactivity constants were calculated. The FERO and ABTS oxidation catalysed by L95 laccase were investigated. The initial reaction rate dependencies on the substrates concentrations were obtained. The analysis of the results was performed by applying Michael-Menten equation and the values of apparent KM and Vmax, as well as catalytic and oxidation constants were calculated. The dependencies of the initial reaction rate on the buffer solutions pH and their components were measured also the optimal pH of the substrates oxidation reactions were determined. The oxygen consumption was registered L95 laccase catalysed oxidation of FERO and ABTS by oxygen electrode and initial reaction rate was calculated, as so as oxygen consumption dependences on substrate concentrations. The oxygen consumption ADH IIG catalysed oxidation of alcohols and laccases catalysed regeneration of mediators (second qADH substrate) were registered. Structure: introduction, 3 chapters, conclusions, references. Thesis consist of: 85 p. of text, 50 pictures, 8 tables, 109 bibliographical entries.