Antimikrobinio peptido iš Pediococcus acidilactici JEM-1 savybių tyrimas

Abstract

Šiame baigiamajame magistro darbe buvo tiriamas antimikrobinis peptidas, kurį gamina Pediococcus acidilactici JEM-1 bakterijos. Pirmiausia buvo tobulintas šio bakteriocino gryninimo būdas iš bakterijų kultivavimo terpės, įvertinta tikslinio produkto išeiga: iš 250 mL terpės gaunama 159 ± 8 μg pediocino, turinčio antimikrobinį aktyvumą prieš jautrias Bacillus subtilis bakterijas. Pediocino grynumas tikrintas tricino-NaDS-PAAG elektroforezės ir kapiliarinės zonų elektroforezės metodais. Pagal elektroforetinį judrumą nustatyta apytikslė pediocino molekulinė masė yra 4,2 kDa. Žiedinio dichroizmo metodu nustatyta, kaip keičiasi pediocino antrinė struktūra priklausomai nuo tirpalo pH, joninės jėgos bei temperatūros. Skirtingos pH vertės turi nevienareikšmį poveikį pediocino antrinėje struktūroje, didėjant joninei jėgai α-spiralių kiekis nežymiai didėja, o β-klosčių mažėja. Kylant temperatūrai stebima α-spiralių mažėjimo ir β-klosčių didėjimo tendencija. Pediocino lydymosi temperatūra nėra aukšta, jis pasižymi savaimine renatūracija. Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, metodinė dalis, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis – 63 p. teksto be priedų, 18 iliustr., 8 lent., 72 bibliografiniai šaltiniai. Atskirai pridedami darbo priedai.

The aim of this work was to study an antimicrobial peptide from Pediococcus acidilactici JEM-1. At first, the purification method of this bacteriocin was improved and final product amount was evaluated. 159 ± 8 μg of the pediocin which has an antimicrobial activity against sensitive Bacillus subtilis bacteria were obtained from 250 mL growth media. Its purity was checked by capilliary zone electrophoresis and Tricine-SDS-PAGE. An approximate molecular weight of pediocin determined by electrophoretic mobility is 4,2 kDa. Circular dichroism was performed to evaluate changes of the secondary structure of pediocin due to pH, ionic strenght and temperature. Different pH values have mixed results on secondary structure. When ionic strenght is increased, an amount of α-helixes slightly increases and amount of β-sheets decreases. A tendency of decrease of α-helixes and increase of β-sheets as temperature rises was observed. Even though its melting temperature is not high, pediocin has an ability to renaturate. Thesis has six parts: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusion, references. Thesis consists of 63 p. text without appendices, 18 pictures, 8 tables., 72 bibliographical entries. Appendices are added.