Grybinių hidrofobinų nustatymas ir apibūdinimas

Abstract

Hidrofobinai yra unikaliomis savybėmis pasižymintys baltymai, sudaryti iš maždaug 70– 130 aminorūgščių ir savo sandaroje turintys visai hidrofobinų šeimai būdingus 8 cisteinus, sujungtus 4 disulfidiniais ryšiais. Pagrindinė hidrofobinų savybė yra gebėjimas formuoti amfifilinius sluoksnius ant paviršių ir taip pakeisti jų savybes – hidrofilinę medžiagą paversti hidrofobine ir atvirkščiai. Visa tai nulemia šių baltymų bifunkinė molekulinė struktūra su hidrofiline ir hidrofobine pusėmis. Būtent dėl šios priežasties hidrofobinai gali būti plačiai pritaikomi įvairiose srityse, siekiant pagerinti medžiagų savybes – hidrofiliškumą, imobilizuotų molekulių aktyvumą ir stabilumą. Baigiamajame magistro darbe buvo tirtas Aspergillus fumigatus hidrofobinas RodA ir jo savybės. Molekulinės biologijos metodais nustatytas už RodA sintezę atsakingas genas rodA, kuris vėliau panaudotas ekspresijos sistemos kūrimui. Darbe taip pat buvo išgrynintas rekombinantinis baltymas RodA, ištirtas jo gebėjimas formuoti į amiloidines fibriles panašias struktūras. Biologiškai aktyvus rekombinantinis baltymas RodA vėliau buvo panaudotas gliukozės oksidazės imobilizacijai ant aukso elektrodo kaip matrica, siekiant ištirti poveikį imobilizuotos gliukozės oksidazės veikimui. Darbą sudaro 6 dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir tyrimo metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados, literatūros sąrašas. Darbo apimtis: 84 p. teksto, 36 paveikslėliai, 13 lentelių, 3 grafikai, 55 bibliografiniai šaltiniai.

Hydrophobins are proteins with unique properties, consisting of approximately 70–130 amino acids and containing 8 cysteines, characteristic of the entire hydrophobin family, linked by 4 disulfide bonds. A key property of hydrophobins is their ability to form amphiphilic layers on surfaces and thus change their properties, turning a hydrophilic material into a hydrophobic one and vice versa. This is due to the bifunctional molecular structure of these proteins with hydrophilic and hydrophobic sides. It is for this reason that hydrophobins can be widely used in a variety of applications to improve the properties of materials, such as hydrophilicity, activity and stability of immobilised molecules. The hydrophobin RodA of Aspergillus fumigatus and its properties were investigated in the final master thesis. The gene responsible for the synthesis of RodA was identified by molecular biology techniques and subsequently used to design an expression system. The recombinant protein RodA was also purified and its ability to form amyloid fibril-like structures was investigated. The biologically active recombinant protein RodA was subsequently used to immobilise glucose oxidase on a gold electrode as a matrix to investigate the effect on the performance of immobilised glucose oxidase. Structure: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references. Thesis consists of: 84 p. without apendixes, 36 pictures, 13 tables, 3 graphs, 55 bibliographical entries.