Hipoksijos indukuojamo faktoriaus - 3α pre-iRNR alternatyvaus splaisingo reguliacija
Abstract
Baigiamojo magistro darbo tyrimo objektas – pelės HIF-3α baltymą koduojantis genas ir jo pre-iRNR alternatyvaus splaisingo procesas. Darbe pristatomas alternatyvaus HIF-3α pre-iRNR splaisingo reguliacijos tyrimas, atliekant pre-iRNR splaisingo reakcijas in vitro HeLa ląstelių branduolių ekstraktuose. Nustatyta, kad hipoksinėmis sąlygomis augintų HeLa ląstelių branduolių ekstrakte alternatyvūs 3ʹ splaisingo taikiniai splaisingo metu naudojami neefektyviai lyginant su jų panaudojimu normoksinėmis sąlygomis augintų HeLa ląstelių branduolių ekstrakte. Ištirta SR baltymų įtaka alternatyvaus HIF-3α pre-iRNR splaisingo procesui ir nustatyta, kad SR baltymų funkcinis aktyvumas kinta priklausomai nuo deguonies kiekio ląstelinėje aplinkoje. Palyginus U2AF65 splaisingo faktoriaus kiekį hipoksinėmis ir normoksinėmis sąlygomis augintų HeLa ląstelių branduolių ekstraktuose, nustatyta, kad šio baltymo kiekis sumažėja hipoksinėmis sąlygomis. Atlikti tyrimai yra svarbūs suprantant priklausomai nuo deguonies kiekio aplinkoje ląstelėje vykstančius pokyčius pre-iRNR splaisingo lygmenyje, kuriant naujus vėžinių auglių gydymo metodus ir atrandant naujus vėžinius žymenis. The object of this final work was mouse hypoxia inducible factor - 3α gene and its pre-mRNA alternative splicing process. During the course of the work alternative pre-mRNA splicing regulation of HIF-3α was investigated. In vitro reactions of pre-mRNA splicing were performed in under normoxic or hypoxic oxygen conditions cultivated HeLa cells nuclear extracts. There was found that in hypoxic HeLa cells nuclear extract alternative 3ʹ splice sites are used ineffectively compared with their usage in normoxic HeLa cells nuclear extract. The influence of SR proteins purified from HeLa cells on alternative HIF-3α pre-mRNA splicing was investigated. There was found that functional activity of SR proteins varies depending on oxygen tension in cellural environment. Also there was determined that amount of U2AF65 splicing factor in HeLa cells nuclear extracts is reduced by hypoxia. These investigations and results are important trying to understand the complex cell response to hypoxia, control pre-mRNA splicing changes processed under hypoxic conditions, create new methods for solid tumours treatment.