Saccharomyces cerevisiae K2 mikocino išskyrimas ir biocidinio profilio nustatymas

Abstract

S. cerevisiae sintetinamo K2 toksino aptikimas ir analizė yra apsunkinti dėl žemo baltymo sintezės lygio, todėl šiame baigiamajame darbe kuriama efektyvi mikocino išskyrimo ir gryninimo sistema, paremta chromatografijos metodais, bei charakterizuotas negryninto K2 baltymo poveikis prieš gamtinius mikroorganizmus. Šiam tikslui pasiekti sekrecinė terpė, kurioje auginamos S. cerevisiae ląstelės, atskirta ir sukoncentruota 25 kartus. Atsižvelgiant į terpėje esančio K2 toksino struktūros ypatybes buvo pritaikyti gelfiltracijos, jonų mainų, hidrofobinės, afininės chromatografijos sorbentai, optimizuotos baltymo sorbavimo ir eliucijos sąlygos. Tikrinant baltymo grynumą elektroforetinės analizės metu bei įvertinant jo aktyvumą, parinkti trys gryninimo etapai, kuriuos sudaro SP-Sepharose katijonų mainų chromatografija, CM Sephadex C50 katijonų mainų chromatografija ir Sephadex G75 gelfiltracija. K2 toksino biocidinės savybės ištirtos prieš 24 skirtingų rūšių mieles, 11 iš jų – jautrios mikocino poveikiui. Darbą sudaro šešios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, rezultatai ir jų aptarimas, išvados ir literatūros sąrašas. Darbo apimtis: 64 p. teksto be priedų, 36 iliustr., 6 lent., 71 bibliografinis šaltinis, 3 priedai.

The detection and analysis of K2 toxin synthesized by S. cerevisiae is complicated due to the low level of protein synthesis. Therefore, in this study, we developed an efficient mycocin isolation and purification steps based on chromatographic methods and characterized the effect of unpurified K2 protein against microorganisms found in nature. To achieve this goal, the synthetic medium in which S. cerevisiae cells were grown was isolated and concentrated 25-fold. Considering structural features of K2 toxin in the medium, protein sorbtion and elution conditions were optimized and different chromatography sorbents (gel filtration, ion exchange, hydrophobic, affinity chromatography) were applied. Three purification steps consisting of SP-Sepharose cation exchange chromatography, CM Sephadex C50 cation exchange chromatography and Sephadex G75 gel filtration were selected by checking the purity of the protein during electrophoretic analysis and evaluating its activity. The biocidal properties of K2 toxin have been studied against 24 different yeast species, 11 of which are sensitive to mycocin. The work consists of six parts: introduction, literature review, materials and methods, results and discussion, conclusions, references. Structure: 64 p. text without appendixes, 36 pictures, 6 tables, 71 bibliographical entries, 3 appendixes.