Naminius gyvulius infekuojančių Sarcocystis genties parazitų skyrimo iš vandens telkinių metodikos optimizavimas

Abstract

Sarcocystis gentis – tai vienaląsčių gyvūnų parazitų grupė, kuriai būdingas dviejų šeimininkų gyvybinis ciklas. Iki šiol Sarcocystis infekcija dažniausiai buvo tiriama morfologiniais arba molekuliniais metodais, naudojant gyvulių skerdeną, dėl to nėra žinoma, kokių Sarcocystis parazitų rūšių gali būti vandens telkiniuose ir kokios įtakos jie gali turėti žmonių bei naminių gyvulių sveikatai. Šio darbo tikslas buvo optimizuoti parazitų skyrimo iš vandens metodiką ir molekuliniais metodais įvertinti naminius gyvulius infekuojančių Sarcocystis parazitų įvairovę vandens telkiniuose. Darbo metu buvo parinktos tinkamos sąlygos vandens mėginių surinkimui ir sporocistų išskyrimui iš vandens mėginių, optimizuotas gDNR išskyrimo metodas. Tyrimų metu išbandžius įvairaus tipo PGR, buvo padaryta išvada, kad tinkamiausias metodas yra lizdinė PGR, tiek pirmo, tiek antro etapo metu, naudojant rūšiai specifinius pradmenis. Darbo metu buvo parinktos pradmenų poros, specifiškos ir tinkamos 6 rūšių identifikavimui: S. cruzi, S. bovifelis, S. hirsuta, S. tenella, S. capracanis ir S. miescheriana. Taikant optimizuotą molekulinės diagnostikos metodiką, buvo ištirta 114 vandens mėginių. Didžiausia Sarcocystis infekcija nustatyta kanaluose (86 %) bei tvenkiniuose (83 %), dažniausiai mėginiuose identifikuotos ožkas infekuojanti S. capracanis (46 %) ir galvijus infekuojanti S. bovifelis (45 %), rečiausiai galvijus infekuojančios S. cruzi (10 %) ir S. hirsuta (7 %) rūšys bei kiaules infekuojanti S. miescheriana (8 %). 2020 m. surinktuose vandens mėginiuose naminius gyvulius infekuojantys Sarcocystis parazitai identifikuoti 4 kartus dažniau nei 2019 m. Apibendrinus gautus rezultatus, galima teigti, jog naminius gyvulius infekuojančių Sarcocystis genties parazitų identifikavimo iš vandens metodika buvo optimizuota. Darbą sudaro septynios dalys: įvadas, literatūros apžvalga, medžiagos ir metodai, rezultatai, duomenų apibendrinimas ir analizė, išvados ir literatūros sąrašas. Darbo apimtis – 58 p. teksto be priedų, 22 iliustr., 5 lent., 61 bibliografinis šaltinis.

The genus Sarcocystis is a group of unicellular animal parasites with a life cycle of two hosts. To date, Sarcocystis infection has been mostly studied by morphological or molecular methods using animal carcasses therefore it is not known what Sarcocystis species may be present in water bodies and what impact they may have on the health of humans and domestic animals. The objective of the present study was to optimize the molecular-based method for the identification of Sarcocystis species from farmed animals in water samples. During the work, suitable conditions for the collection of water samples and isolation of sporocysts from water samples were selected, and the gDNA isolation method was optimized. After studies of different types of PCR, it was concluded that nested PCR was the most appropriate method, both for the first and the second reaction, using species-specific primers. Primer pairs that were specific and suitable for identification of S. cruzi, S. bovifelis, S. hirsuta, S. tenella, S. capracanis and S. miescheriana were selected. 114 water samples were analyzed using the optimal molecular diagnostic methodology. The highest Sarcocystis infection rate was detected in canals (86%) and reservoirs (83%). Two species were most commonly identified in water samples – S. capracanis infecting goats (46%) and S. bovifelis infecting cattle (45%). The least frequently identified species were S. cruzi (10%), S. hirsuta (7%) and S. miescheriana (8%). In 2020, domestic animals infecting Sarcocystis parasites were identified 4 times more than in water samples collected in 2019. Based on the obtained results, it can be concluded that the methodology of identification of domestic animals infecting Sarcocystis parasites from the water has been optimized. Structure: introduction, literature, materials and methods, results, summary and discussion, conclusions, references. Thesis consists of – 58 p. text without appendixes, 22 pictures, 5 tables, 61 bibliographical entries.