Alkohoksidazė iš mielių Pichia pastoris. Gryninimas ir savybės
Santrauka
Šiame darbe buvo parinkta AO gryninimo schema: biomasės suardymas, centrifugavimas, pašalinių baltymų išsodinimas amonio sulfatu ir jonų - mainų chromatografija. Po chromatografinio gryninimo SDS - PAGE elektoforezėje gaunama viena juostelė pagal molekulinių masių standartus atitinka AO monomerui. Išgrynitam baltymui buvo ištirtos šios savybės: aktyvumo priklausomybė nuo pH, temperatūrinis optimumas, pH stabilumas, bei temperatūrinis stabilumas. Taip pat tirtas subvienetų susiuvimas trifunkciniu susiuvančiu agentu 1,3,5-triakriloit-heksahidro-s-triazinu. Atlikta fermento imobilizacija ant dviejų nešiklių: modifikuoto poliuretano ir modifikuoto chitozano. Ištirtos kai kurios imobilizuotų preparatų savybės. Alcohol oxidase (AO) from the methylotropic yeast Pichia pastoris was purified by ammonium sulfate precipitation and ion exchange chromatography. The purified emzyme gave one band by SDS - PAGE electrophoresis with molecular weight expected for AO monomer. Optimal pH and temperature were found for the purified enzyme. pH and temperature stability was determined. Cross - linking of AO subunits by 1,3,5 -triacryloyl - hexahydro - s- triazine was investigated. AO was immobilized on polyurethane carrier and on modified chitozan. Properties of the immobilized AO were investigated.